1.0目的

制定使用歧管的膜過濾法對樣品進(jìn)行無菌測試的程序。

2.0范圍

適用于質(zhì)量控制微生物實(shí)驗(yàn)室中稀釋研究和穩(wěn)定性研究樣品的無菌測試。

3.0責(zé)任

受過訓(xùn)練的質(zhì)量控制/微生物學(xué)

4.0問責(zé)制

部門主管

5.0程序

5.1一般說明和注意事項(xiàng)

5.1.1按照SOP進(jìn)入和退出微生物檢測和無菌檢測區(qū)域。
5.1.2確保所有無菌或無菌物品在日期之前有效/未過期，并且包裝袋是完整的。如果發(fā)現(xiàn)任何包裝損壞或完整性受損，請不要使用此類材料。
5.1.3確保要使用的所有培養(yǎng)基和稀釋劑均已預(yù)先孵育。檢查介質(zhì)是否受到污染或物理損壞。對于液體硫代乙醇酸酯培養(yǎng)基，如果超過三分之一的培養(yǎng)基已獲得粉紅色（刃天青環(huán)），則請勿使用此類培養(yǎng)基容器。
5.1.4檢查物理參數(shù)（溫度，濕度和壓差）），并在開始活動(dòng)前確保它們在限制范圍內(nèi)。
5.1.5在每次無菌測試期間，應(yīng)按照SOP 進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測。

5.2將材料轉(zhuǎn)移到無菌測試區(qū)和cRABS

5.2.1進(jìn)行無菌測試所需的材料，如培養(yǎng)基，沖洗液或稀釋劑，測試附件即，鑷子，剪刀，帶有管道的春分排水盤，排水收集容器等，應(yīng)在高壓滅菌器中滅菌，卸載并儲存在無菌環(huán)境中一側(cè)（緩沖室）。
5.2.2所有其他材料應(yīng)按以下方式轉(zhuǎn)移：
5.2.2.1將所有與無菌性測試有關(guān)的材料（例如樣品和其他無菌配件）保存在通向LAL測試室的培養(yǎng)箱中的通過箱中。
5.2.2.2從LAL室卸載物料并保存在LAF中。
5.2.2.3取下產(chǎn)品小瓶的翻轉(zhuǎn)密封，并使用過濾的消毒液對小瓶的外表面進(jìn)行消毒。
5.2.2.4使用過濾的消毒液消毒無菌附件包裝的外表面。
5.2.2.5將所有物料轉(zhuǎn)移到動(dòng)態(tài)通道箱開口處至緩沖室。確保動(dòng)態(tài)通道盒處于開啟狀態(tài)。
5.2.2.6從緩沖室卸下物料，然后轉(zhuǎn)移到無菌測試室。
5.2.3按照SOP
5.2.4 操作cRABS 5.2.4將所有必需的材料，如培養(yǎng)基容器，已消毒的配件（如歧管，過濾漏斗，鑷子，剪刀等），已過濾的消毒液和70％IPA和產(chǎn)品樣品送入無菌測試室。
5.2.5除產(chǎn)品樣品外，所有材料均應(yīng)保存在cRABS檢驗(yàn)箱中。
5.2.6關(guān)閉cRABS通行箱，并用已過濾的70％IPA擦拭材料的外表面。打開紫外線燈，使材料暴露不少于15分鐘。
5.2.7至少15分鐘后，通過提供的通道將材料從cRABS通行箱轉(zhuǎn)移到cRABS。
5.2.8如果是樣品，請將其保存在cRABS 通行證箱中，關(guān)閉通行箱，并用過濾后的70％IPA擦拭樣品的外表面。不要打開紫外線燈。讓消毒劑干燥。
5.2.9通過提供的通道將樣品從cRABS通行箱轉(zhuǎn)移到cRABS。
5.2.10試驗(yàn)前，確保每件物品上的消毒劑均已正確干燥且包裝成一體。
5.2.11將排水收集容器牢固地連接到cRABS排水口。

5.3樣品要求

5.3.1容器數(shù)量：根據(jù)相應(yīng)的規(guī)程
5.3.2待測樣品的體積
穩(wěn)定性樣品：

容器內(nèi)容	每種介質(zhì)要測試的zui小數(shù)量
少于1毫升	總含量
1至40毫升	內(nèi)容物的一半但不少于1毫升
大于40毫升但小于100毫升	20毫升
100毫升以上	含量的10％，但不少于20 ml

注意：如果填充量大于10 ml，則考慮從3個(gè)小瓶中剩下的樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素測試（在測試之前合并）
稀釋研究樣品：根據(jù)各自的方案，但不少于20 ml

5.4使用流形的開放漏斗法進(jìn)行無菌測試

5.4.1將無菌歧管放置在cRABS內(nèi)，并通過排水收集容器或燒瓶連接到真空泵。
5.4.2將無菌的膜過濾漏斗放在歧管的支架上。將無菌的0.45µ 膜過濾器放在過濾漏斗的過濾器支架上。
5.4.3打開過濾組件的蓋子，并用100 ml沖洗液潤濕膜，然后打開真空泵進(jìn)行過濾。
5.4.4無菌地打開產(chǎn)品容器的密封并將每個(gè)產(chǎn)品容器的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到過濾組件中?；蛘?，使用無菌注射器和針頭無菌取出內(nèi)容物并轉(zhuǎn)移。如果是凍干產(chǎn)品，請先用所需體積的無菌稀釋劑重新配制樣品，然后再轉(zhuǎn)移內(nèi)容物。
5.4.6打開真空泵并過濾內(nèi)容物。
5.4.7過濾樣品后，加入100 ml沖洗液并過濾。重復(fù)此過程，直到3 x 100 ml沖洗液通過膜過濾。
注意：如果與以上不同，應(yīng)根據(jù)驗(yàn)證更改沖洗液和沖洗液的體積。
5.4.8沖洗后，用無菌鑷子和剪刀將膜無菌切成兩半。將膜的一半轉(zhuǎn)移到100 ml大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基中，另一部分轉(zhuǎn)移到100 ml硫代乙醇酸液體培養(yǎng)基試管中。
5.4.9在試管上貼上產(chǎn)品名稱，批號/ AR號，介質(zhì)批號，日期和分析員姓名縮寫。

5.5負(fù)面產(chǎn)品控制測試

5.5.1在每個(gè)無菌測試階段進(jìn)行一次陰性對照測試，以作為測試階段中培養(yǎng)基和稀釋液無菌性和條件的對照。
5.5.2通過以100毫升0.1％無菌蛋白water水為產(chǎn)品并在操作過程中進(jìn)行以下
zui大操作來進(jìn)行測試：5.5.2.1如果在測試過程中進(jìn)行的zui大操作是針對凍干產(chǎn)品，則所有步驟凍干產(chǎn)品測試中涉及的產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行陰性產(chǎn)品控制。
5.5.2.2如果在測試期間對液體產(chǎn)品進(jìn)行的zui大操作，則應(yīng)對液體產(chǎn)品中涉及的所有步驟進(jìn)行負(fù)面產(chǎn)品控制。

5.6物料的轉(zhuǎn)移和處置

5.6.1測試完成后，將所有附件，用過的樣品容器，空的介質(zhì)稀釋劑容器通過通道箱從緩沖室轉(zhuǎn)移到高壓滅菌室，轉(zhuǎn)移到高壓滅菌區(qū)。
5.6.2將培養(yǎng)罐和培養(yǎng)基管通過動(dòng)態(tài)傳遞箱從緩沖室轉(zhuǎn)移到LAL測試室，然后通過傳遞箱從LAL測試室傳遞到培養(yǎng)箱。
5.6.3用過濾的消毒劑清潔cRABS。通過將足夠量的消毒劑溶液通過端口和管道轉(zhuǎn)移，使所有表面都與消毒劑溶液接觸，從而對端口和管道進(jìn)行消毒以收集下水道。
5.6.4如果排水收集管關(guān)閉閥門，則斷開不銹鋼打開TC夾以打開容器。通過緩沖室中的通過箱將容器轉(zhuǎn)移到高壓滅菌器中。
5.6.5通過添加適當(dāng)?shù)娜セ顒┤セ钊萜髦械娜芤?，并按照SOP進(jìn)行處置。

5.7孵化與觀察

5.7.1在22.5±2.5°C下孵育大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基（SCM）無菌試管，在32.5±2.5°C下孵育液體硫代乙醇酸酯培養(yǎng)基（FTG）無菌試管14天。
5.7.2在每個(gè)工作日中，檢查在14天的溫育期內(nèi)微生物生長的跡象，并記錄結(jié)果。如果第14天是每周休息或放假，則在下一個(gè)工作日進(jìn)行觀察。
5.7.3在觀察過程中，任何渾濁，渾濁，沉淀，棉球類型增長，透明介質(zhì)（渦旋時(shí)底部從底部升起）的明顯增長的證據(jù)，然后移開此類罐/管并按照SOP 進(jìn)行識別/調(diào)查。在這種觀察的那天。
5.7.4孵育結(jié)束后，請按照下列說明處理培養(yǎng)基SOP處理媒體。

5.8驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)

5.8.1在培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，如果在任何無菌測試介質(zhì)中都沒有微生物生長的跡象，則被測樣品/產(chǎn)品符合無菌要求。
5.8.2如果在任何一種介質(zhì)中均發(fā)現(xiàn)了微生物生長的證據(jù)，則被測試的樣品/產(chǎn)品不符合無菌測試，除非可以清楚地證明該測試對與樣品/產(chǎn)品無關(guān)的原因無效經(jīng)過測試。僅當(dāng)滿足以下一個(gè)或多個(gè)條件時(shí)，該試驗(yàn)才被視為無效：
5.8.2.1對無菌試驗(yàn)區(qū)進(jìn)行的微生物監(jiān)測表明存在故障。
5.8.2.2對所涉及的測試過程中使用的測試程序進(jìn)行檢查可以發(fā)現(xiàn)故障。
5.8.2.3在陰性對照中發(fā)現(xiàn)微生物生長。
5.8.2.4在確定從測試中分離出的微生物的身份之后，可以明確地將該物種（或這些物種）的生長歸因于進(jìn)行無菌測試程序所用的材料和/或技術(shù)的缺陷。
5.8.5如果宣布測試無效，則必須以與原始測試相同的單位數(shù)重復(fù)進(jìn)行測試。
5.8.6如果在重復(fù)測試中沒有發(fā)現(xiàn)微生物生長的跡象，則所檢查的產(chǎn)品符合無菌測試。
5.8.7如果在重復(fù)測試中發(fā)現(xiàn)微生物生長，則所檢查的產(chǎn)品不符合無菌測試。
有關(guān)：真菌和細(xì)菌常用培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件

6.0縮寫

6.1 SOP-標(biāo)準(zhǔn)操作程序
6.2 cRAB-封閉式限制進(jìn)入障礙系統(tǒng)
6.3％-百分比
6.4 UV-紫外線
6.5°C-攝氏度
6.6 ml-毫升
6.7 SCA-大豆酪蛋白消化瓊脂
6.8 SCM-大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基