滅菌法系指用恰當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手法將物品中活的微生物殺滅或除掉，從而使物品殘存活微生物的概率降低**預(yù)期的無菌確保水平的辦法。本法適用于制劑、質(zhì)料、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌。

無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。關(guān)于任何一批滅菌物品而言，肯定無菌無法確保，也無法用實驗來證實。一批物品的無菌特性只能相對地經(jīng)過物品中活微生物的概率低**某個可接受的水平來表述，即無菌確保水平(Sterility assurance level，簡稱SAL)。實踐出產(chǎn)進程中，滅菌是指將物品中污染微生物的概率降低**預(yù)期的無菌確保水平。終究滅菌的物品微生物存活概率，即無菌確保水平不得高于10－6。已滅菌物品到達的無菌確保水平可經(jīng)過驗證斷定。
滅菌物品的無菌確保不能依賴于終究商品的無菌查驗，而是取決于出產(chǎn)進程中選用合格的滅菌技能、嚴(yán)厲的GMP管理和良好的無菌確保體系。滅菌技能的斷定應(yīng)綜合思考被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌辦法的有用性和經(jīng)濟性、滅菌后物品的完整性和安穩(wěn)性等要素。
滅菌程序的驗證是無菌確保的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗證后，方可交付正式運用。驗證內(nèi)容包括：
(1)編撰驗證計劃及擬定評價規(guī)范。
(2)承認(rèn)滅菌設(shè)備技能資料齊全、裝置正確，并能處于正常運轉(zhuǎn)(裝置承認(rèn))。
(3)承認(rèn)滅菌設(shè)備、要害操控和記載體系能在規(guī)則的參數(shù)范圍內(nèi)正常運轉(zhuǎn)(運轉(zhuǎn)承認(rèn))。
(4)選用被滅菌物品或模仿物品按預(yù)訂滅菌程序進行重復(fù)實驗，承認(rèn)各要害技能與參數(shù)契合預(yù)訂規(guī)范，斷定經(jīng)滅菌物品的無菌確保水平契合規(guī)則(性能承認(rèn))。
(5)匯總并完善各種文件和汜錄，編撰驗證陳述。
平時出產(chǎn)中，應(yīng)對滅菌程序的運轉(zhuǎn)狀況進行監(jiān)控，承認(rèn)要害參數(shù)(如溫度、壓力、時刻、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照劑量等)均在驗證斷定的范圍內(nèi)。滅菌程序應(yīng)定時進行再驗證。當(dāng)滅菌設(shè)備或程序發(fā)作改動(包括滅菌物品裝載辦法和數(shù)量的改動)時，應(yīng)進行再驗證。
物品的無菌確保與滅菌技能、滅菌前物品被污染的程度及污染菌的特性有關(guān)。因而，應(yīng)根據(jù)滅菌技能的特色擬定滅菌物品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受極限并進行監(jiān)控，并在出產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)采納各種辦法降低污染，確保微生物污染操控在規(guī)則的極限內(nèi)。
滅菌的冷卻期間。應(yīng)采納辦法避免已滅菌物品被再次污染。任何狀況下，都應(yīng)請求容器及其密封體系確保物品在有用期內(nèi)契合無菌請求。
滅菌辦法
常用的滅菌辦法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過濾除菌法?？筛鶕?jù)被滅菌物品的特性選用一種或多種辦法組合滅菌。只需物品答應(yīng)，應(yīng)盡也許選用終究滅菌法滅菌。若物品不適合選用終究滅菌法，可選用過濾除菌法或無菌出產(chǎn)技能到達無菌確保請求，只需也許，應(yīng)對非終究滅菌的物品作彌補性滅菌處理(如流轉(zhuǎn)蒸汽滅菌)。
一、濕熱滅菌法
本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)運用高壓飽滿蒸汽，過熱水噴淋等手法使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)作變性而殺滅微生物的辦法。該法滅菌能力強．為熱力滅菌中**有用、運用**廣泛的滅菌辦法。藥品、容器、培育基、無菌衣、膠塞以及別的遇高溫文濕潤不發(fā)作變化或損壞的物品。均可選用本法滅菌。流轉(zhuǎn)蒸汽不能徹底殺滅細(xì)菌孢子，通?？勺鳛椴荒蜔釤o菌商品的輔佐滅菌手法。
濕熱滅菌條件的挑選應(yīng)思考滅菌物品的熱安穩(wěn)性、熱穿透力、微生物污染程度等要素。濕熱滅菌條件通常選用121℃×15min、121℃×30min或116℃×40min的程序，也可選用別的溫度和時刻參數(shù)，但不管選用何種滅菌溫度和時刻參數(shù)，都有必要證實所選用的滅菌技能和監(jiān)控辦法在正常運轉(zhuǎn)進程中能確保物品滅菌后的SAL≤10－6。當(dāng)滅菌程序的選定選用F0值概念時(F0值為規(guī)范滅菌時刻，系滅菌進程賦予被滅菌物品121℃下的滅菌時刻)，應(yīng)采納格外辦法確保被滅菌物品能得到滿足的無菌確保，此刻，除對滅菌程序進行驗證外，還有必要在出產(chǎn)進程中對微生物進行監(jiān)控，證實污染的微生物目標(biāo)低于設(shè)定的極限。對熱安穩(wěn)的物品，滅菌技能可**過度殺滅法，以確保被滅菌物品取得滿足的無菌確保值。熱不安穩(wěn)性物品，其滅菌技能的斷定依賴于在必定的時刻內(nèi)，必定的出產(chǎn)批次的被滅菌物品滅菌前微生物污染的水平及其耐熱性。因而，平時出產(chǎn)全進程應(yīng)對商品中污染的微生物進行接連地、嚴(yán)厲地監(jiān)控．并采納各種辦法降低物品微生物污染水平，格外是避免耐熱菌的污染。熱不安穩(wěn)性物品的F0值通常不低干8min。
選用濕熱滅菌器進行濕熱滅菌時，被滅菌物品應(yīng)有恰當(dāng)?shù)难b載辦法，不能擺放過密，以確保滅菌的有用性和均一性。
濕熱滅菌法應(yīng)承認(rèn)滅菌柜在不一樣裝載時也許存在的冷點。當(dāng)用生物指示劑進一步承認(rèn)滅菌作用時，應(yīng)將其置于冷點處。水法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。
二、干熱滅菌法
本法系指將物品置于干熱滅菌柜、地道等滅菌器設(shè)備中，運用干熱空氣到達殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的辦法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃用具、金屬制容器、纖維成品、固體試藥、液狀白臘等均可選用本法滅菌。
干熱火菌條件通常為160～170℃×120min以上、170～l80℃×60min以上或250℃×45min以上，也可選用別的溫度和時刻參數(shù)。不管選用何種滅菌條件，均應(yīng)確保滅菌后的物品的SAL≤10－6。選用干熱過度殺滅后的物品通常無需進行滅菌前污染微生物的測定。250℃×45min的干熱滅菌也可除掉無菌商品包裝容器及有關(guān)出產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。#p#分頁標(biāo)題#e#
采州干熱滅菌時，被滅菌物品應(yīng)有恰當(dāng)?shù)难b載辦法，不能擺放過密，以確保滅菌的有用性和均一性。
干熱滅菌法應(yīng)承認(rèn)滅菌柜中的溫度散布契合設(shè)定的規(guī)范及斷定**冷點方位等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗證實驗是證實除熱原進程有用性的實驗。通常將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素參加待去熱原的物品中，證實該去熱原技能能使內(nèi)毒素**少降低3個對數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗證實驗所用的細(xì)菌內(nèi)毒素通常為大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendoxin)。
三、輻射滅菌法
本法系指將物品置于適合放射源輻射的γ射線或適合的電子加速器發(fā)作的電子束中進行電離輻射而到達殺滅微生物的辦法。本法**常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、出產(chǎn)輔佐用品、不受輻射損壞的質(zhì)料藥及成品等均可用本法滅菌。
選用輻射滅菌法滅菌的無菌物品其SAL應(yīng)≤10－6。γ射線輻射滅菌所操控的參數(shù)主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)。泫劑量的擬定應(yīng)思考滅菌物品的適應(yīng)性及也許污染的微生物**大數(shù)量及**強抗輻射力，事先應(yīng)驗證所運用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有用性及安穩(wěn)性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對終究商品，質(zhì)料藥、某些醫(yī)療器件應(yīng)盡也許選用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強度進行測定，以評價滅菌進程賦予該滅菌物品的無菌確保水平。關(guān)于已設(shè)定的劑量，應(yīng)定時審閱，以驗證其有用性。
滅菌時，應(yīng)選用恰當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理辦法對滅菌物品吸收的輻射劑量進行監(jiān)控。以充沛證實滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)則的極限內(nèi)。如選用與滅菌物品一同被輻射的放射性劑量計，劑量計要置于規(guī)則的部位。在初裝置時劑量計運用規(guī)范源進行校對，并定時進行再校對。
60Co-γ射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為矮小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus)。
四、氣體滅菌法
本法系指用化學(xué)消毒劑構(gòu)成的氣體殺滅微生物的辦法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過氧化氫、甲醛、臭氧(O3)等，本法適用于在氣體中安穩(wěn)的物品滅菌。選用氣體滅菌法時，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。
本法中**常用的氣體是環(huán)氧乙烷，通常與80％～90％的慵懶氣體混合運用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進行。該法可用于醫(yī)療器械，塑料成品等不能選用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜運用本法滅菌。
選用環(huán)氧乙烷滅菌時，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時刻是影響滅菌作用的主要因數(shù)?？蛇x用下列滅菌條件：
    溫度              54℃±10℃
    相對濕度          60％±10％
    滅菌壓力          8×105Pa
    滅菌時刻          90min
滅菌條件應(yīng)予驗證。滅菌時，將滅菌腔室抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)到達設(shè)定的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌進程中，應(yīng)緊密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時刻。必要時運用生物指示劑監(jiān)控滅菌作用。本法滅菌程序的操控具有必定難度，整個滅菌進程應(yīng)在技能嫻熟人員的監(jiān)督下進行。滅菌后，應(yīng)采納新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和別的易揮發(fā)性殘留物散失。并對滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反響商品進行監(jiān)控，以證實其不超越規(guī)則的濃度，避免發(fā)生毒性。    ·
選用環(huán)氧乙烷滅菌時，應(yīng)進行泄漏實驗，以承認(rèn)滅菌腔室的密閉性。滅菌程序承認(rèn)時，還應(yīng)思考物品包裝資料和滅菌腔室巾物品的擺放辦法對滅菌氣體的分散和浸透的影響。生物指示劑通常選用枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。
五、過濾除菌法
本法系運用細(xì)菌不能經(jīng)過細(xì)密具孔濾材的原理以除掉氣體或液體中微生物的辦法。常用于氣體、熱不安穩(wěn)的藥品溶液或質(zhì)料的除菌。
除菌過濾器選用于孔徑散布均勻的微孔濾膜作過濾資料，微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。濾膜原料依過濾物品的性質(zhì)及過濾意圖而定。約品牛產(chǎn)十選用的除菌濾膜孔徑通常不超越0.22μm。過濾器的孔徑界說來自過濾器對微生物的截留，而非均勻孔徑的散布系數(shù)。所以，用于終究除菌的過濾器有必要挑選具有截流實驗證實的除菌級過濾器。過濾器對濾液的吸附不得影響藥品質(zhì)量，不得有纖維掉落，禁用含石棉的過濾器。過濾器的運用者應(yīng)了解濾液過濾進程中的分出物性質(zhì)、數(shù)量并評價其毒性影響。濾器和濾膜在運用前應(yīng)進行潔凈處理，并用高壓蒸汽進行滅菌或作在線滅菌。替換種類和批次應(yīng)先清洗濾器，再替換濾芯或濾膜或直接替換濾器。
過濾進程中無菌確保與過濾液體的初始生物負(fù)荷及過濾器的對數(shù)降低值LRV(log reduction value)有關(guān)。LRV系指規(guī)則條件下．被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值。
即：    LRV=lgN0－lgN
式中   N0為商品除菌前的微生物數(shù)量。
       N為商品除菌后的微生物數(shù)量。#p#分頁標(biāo)題#e#
LRV用于表明過濾器的過濾除菌功率，對孔徑為0.22μm的過濾器而言，請求每1cm2有用過濾面積的LRV應(yīng)不小于7。因而過濾除菌時，被過濾商品總的污染量應(yīng)控  制在規(guī)則的極限內(nèi)。為確保過濾除菌作用，可運用兩個除菌級的過濾器串連過濾，或在灌裝前用過濾器進行再次過濾。
在過濾除菌中，通常無法對全進程中過濾器的要害參數(shù)(濾膜孔徑的巨細(xì)及散布，濾膜的完整性及LRV)進行監(jiān)控。因而，在每一次過濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性實驗，即氣泡點實驗或壓力保持實驗或氣體分散流量實驗，承認(rèn)濾膜在除菌過濾進程中的有用性和完整性。完整性的測驗規(guī)范來自于有關(guān)細(xì)菌載留實驗數(shù)據(jù)。除菌過濾器的運用時刻應(yīng)進行驗證，通常不該超越一個工作日，否則應(yīng)進行驗證。
過濾除菌法常用的生物指示劑為缺點假單胞菌(Pseudomonas diminuta)。
經(jīng)過過濾除菌法到達無菌的商品應(yīng)緊密臨控其出產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，應(yīng)在無菌環(huán)境下進行過濾操作。有關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及別的物品應(yīng)選用恰當(dāng)?shù)霓k法進行滅菌，并避免再污染。
六、無菌出產(chǎn)技能
無菌出產(chǎn)技能系指有必要在無菌操控條件下出產(chǎn)無菌制劑的辦法，無菌分裝及無菌凍干是**常見的無菌出產(chǎn)技能。后者在技能進程中須選用過濾除菌法。
無菌出產(chǎn)技能應(yīng)緊密監(jiān)控其出產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應(yīng)在無菌操控的環(huán)境下進行過濾操作。有關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及別的物品應(yīng)選用恰當(dāng)?shù)霓k法進行滅菌。并避免被再次污染。
無菌出產(chǎn)技能進程的無菌確保應(yīng)經(jīng)過培育基無菌灌裝模仿實驗驗證。在出產(chǎn)進程中，應(yīng)緊密監(jiān)控出產(chǎn)環(huán)境的無菌空氣質(zhì)量、操作人員的本質(zhì)、各物品的無菌性。
無菌出產(chǎn)技能應(yīng)定時進行驗證．包括對環(huán)境空氣過濾體系有用性驗證及培育基模仿灌裝實驗。
生物指示劑
生物指示劑系一類特別的活微生物成品，可用于承認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗證、出產(chǎn)進程滅菌作用的監(jiān)控等。用于滅菌驗證中的生物指示劑通常是細(xì)菌的孢子。
1．制備生物指示劑用微生物的基本請求
不一樣的滅菌辦法運用不一樣的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物有必要具有以下特性：
(1)菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌商品中所有也許污染菌的耐受性。
(2)菌種應(yīng)無致病性。
(3)菌株應(yīng)安穩(wěn)。存活期長，易于保存。
(4)易于培育。若運用休眠孢子，生物指示劑中休眠孢子含量要在90％以上。
2．生物指示劑的制備
生物指示劑的制備應(yīng)按必定的程序進行，制備前，需先斷定所用微生物的特性，如D值(微生物的耐熱參數(shù)，系指必定溫度下，將微生物殺滅90％所需的時刻，以分鐘表明)等。菌株運用適官的培育基進行培育。培育物應(yīng)制成懸浮液，其間孢子的數(shù)量應(yīng)占優(yōu)勢，孢子應(yīng)懸浮于無養(yǎng)分的液體中保存。
生物指示劑中包括必定數(shù)量的一種或多種孢子?？芍瞥啥喾N方式。通常是將必定數(shù)量的孢子附著在慵懶的載體上，如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料成品等：孢子懸浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示劑還配有培育基體系。D值除與滅菌條件有關(guān)外，還與微生物存在的環(huán)境有關(guān)。因而，必定方式的生物指示劑制備完成后，應(yīng)測定D值和孢子總數(shù)。生物指示劑應(yīng)選用適宜的資料包裝，并設(shè)定有用期。載體和包裝資料在維護生物指示劑不致污染的一起，還應(yīng)確保滅菌劑穿透并能與生物指示劑充沛觸摸。載體和包裝的規(guī)劃·原則是便于儲存、運送、取樣、搬運接種。
有些生物指示劑可直接將孢子接種**液體滅菌物或具有與其類似的物理和化學(xué)特性的替代品中。運用替代品時，運用數(shù)據(jù)證實二者的等效性。
3．生物指示劑的運用
在滅菌程序的驗證中，雖然可經(jīng)過滅菌進程某些參數(shù)的監(jiān)控來評價滅菌作用，但生物指示劑的被殺滅程度，則是評價一個滅菌程序有用性**直觀的目標(biāo)?？蛇\用市售的標(biāo)    準(zhǔn)生物指示劑，也可運用由平時出產(chǎn)污染菌監(jiān)控中別離耐受性**強的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗證實驗中，需斷定孢子在實踐滅菌條件下的D值，并測定孢子的純度和數(shù)量。驗證時，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比平時檢出的微生物污染量大，耐受性強，以確保滅菌程序有更大的安全性。在終究滅菌法中，生物指示劑應(yīng)聽任滅菌柜的不一樣部位。并避免指示劑直接觸摸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培育基中培育，斷定生物指示劑中的孢子是否被徹底殺滅。
過度殺滅商品滅菌驗證通常不思考微生物污染水平，可選用市售的生物指示劑。對滅菌手法耐受性差的商品，規(guī)劃滅菌程序時，根據(jù)經(jīng)驗預(yù)計在該出產(chǎn)技能中商品微生物污染的水平，挑選生物指示劑的菌種和孢子數(shù)量。這類商品的無菌確保應(yīng)經(jīng)過監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗證所取得的數(shù)據(jù)進行評價。
4．常用生物指示劑
(1)濕熱滅菌法 濕熱滅菌法**常用的牛物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。D值為1.5～  3.0min，每片(或每瓶)活孢子數(shù)5×105～5×106個，在121℃、19min下應(yīng)被徹底殺滅。此外，還可運用生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，如NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955)，D值為0.4～0.8min。
(2)干熱滅菌法  干熱滅菌法**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌抱子(Spores of Bacillus subtilis，如NCIMB 8058、ATCC 9372)。D值大于1.5min，每片活孢子數(shù)5×105～5×106個。去熱原驗證時運用大腸埃希菌內(nèi)毒素(Escherichia coliendomn)，加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒索單位。#p#分頁標(biāo)題#e#
(3)輻射滅菌法  輻射滅菌法**常用的生物指示劑為矮小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus，如NCTC 10327、NCIMB 10692、ATCC 27142)。每片活抱子數(shù)107～108，置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。但應(yīng)注意滅菌物品中所負(fù)載的微生物也許比矮小芽孢桿菌孢子顯現(xiàn)更強的抗輻射力。因而矮小芽孢桿菌孢子可用于監(jiān)控滅菌進程，但不能用于滅菌輻射劑量樹立的根據(jù)。
(4)氣體滅菌法  環(huán)氧乙烷滅菌**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，如NCTC 10073、ATCC 9372)。氣態(tài)過氧化氫滅菌**常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus steatothermophilus，如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。每片活孢子數(shù)1×106～5×106個。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽孢桿菌孢子D值大于2.5min，在環(huán)氧乙烷濃度為600mg／L，相對濕度為60％，溫度為54℃下滅菌，60min應(yīng)被殺滅。
(5)過濾除菌法  過濾除菌法**常用的生物指示劑為缺點假單胞菌(Pseudomonas diminuta，如ATCC 19146)，用于濾膜孔徑為0.22μm的濾器；黏質(zhì)沙雷菌(Serratia  marcescens)(ATCC 1 4756)用于濾膜孔徑為0.45μm的濾器。